用八臨床酶學測定的標準化定時法測定酶活性定時法是根據固定時間內底物消耗量或產物的生成量計算酶活性，這是早期測定酶活性濃度的方法。

用定時法準確測定酶活性濃度，必須了解不同酶促反應速率和時間的關系，應先做預試驗找出酶促反應速率恒定的時期，確定線性時間，然后在這段時間進行測定，避開延滯期和級反應。

定時法中可能引起的誤差二連續監測法測定酶活性連續測定酶反應過程中反應產物或底物的濃度隨時間變化的多點數據，求出酶反應初速度，間接計算酶活性濃度的方法稱為連續監測法。

直接法在不終止酶促反應條件下，直接通過測定反應體系中底物或產物理化特性的變化如吸光度熒光旋光性電導率粘度等計算出酶活性濃度。

只有底物與產物之間，在理化性質等方面有顯著差異時，才能使用直接法。

間接法采用酶偶聯反應是間接法測定酶活性的主要技術特點。

最簡單的酶偶聯反應單底物反應且只有個工具酶模式為被測定酶被檢測物質指示酶催化的反應稱為始發反應，產生被檢測物質產物的反應稱為指示反應。

如果些酶促反應找不到合適的指示酶與其直接偶聯，此時往往還可在始發反應和指示反應之間加入另種酶，將二者連接起來，此反應稱為輔助反應。

模式為般習慣將最后個酶稱指示酶，其他外加的酶稱為輔助酶。

偶聯反應中存在幾個時相預孵育期反應開始只存在底物，不存在指示酶的反應。

延滯期加入底物啟動反應，在啟動后的段短時間內，產物開始出現并逐漸增加，但仍處于較低水平，指示酶反應速度也較低，不能代表測定酶的反應速率。

穩態期產物增加到定程度時，和催化的反應速率相同，達到了穩態期。

此階段特定波長處如吸光度才會有明顯的線性變化。

酶偶聯法測定的吸光度變化指示酶的選擇指示酶的用量測定酶的測定上限分別是測定酶指示酶的米氏常數米曼氏方程在酶偶聯反應中，指示酶催化反應速率的計算公式為式中為測定酶的測定上限，為指示酶的米氏常數，為中間產物濃度。

介紹的另種近似計算法計算延滯期時所需指示酶的量。

假定酶偶聯反應如下第個反應為零級反應，第二個反應為級反應。

如測定時間很短，濃度不高時，指示酶催化反應速率可通過下列公式進行計算式中表示延滯時間，為指示酶的米氏常數，是在時產物為其穩態濃度的百分數，般選用。

三干擾因素其他酶和物質的干擾酶的污染非酶反應分析容器的污染沉淀形成四血清酶活性濃度測定的條件的優化測定酶活性濃度方法所選擇的測定條件應是酶促反應的“最適條件”，即指在所選擇溫度下能使酶促反應的催化活性達到最大。

主要與下述些因素有關如底物輔因子活化劑緩沖液和變構劑種類和濃度指示酶和輔助酶的種類和濃度反應混合液的和離子強度其他可變因素，如已知抑制劑的去除。

方法選擇盡可能采用連續監測法盡量減少操作步驟。

儀器和設備明確規定儀器和設備的各種性能規范。

試劑化學試劑必須具有定純度試驗用水最好是純水或雙蒸水。

自動生化分析儀參數的設臵方法類型終點法或連續監測法。

反應方向分正向向上吸光度增加或負向向下吸光度減低。

波長選擇酶促反應體系吸光度最大的波長樣品量與試劑量應考慮測定的靈敏度和測定上限選用合適的樣品與試劑體積比。

般推薦樣品與試劑體積連續監測法磷酸對硝基苯酚法歲男歲，歲女歲比色法磷酸麝香草酚法連續監測法，即法，即法連續監測法酶偶聯法男女連續監測法谷氨酰羧基對硝基苯胺法連續監測法谷氨酰對硝基苯胺法男女男女連續監測法對硝基苯麥芽庚糖苷法固定時間法乳化液比濁法連續監測法丁酰硫代膽堿法七系數值的計算與應用在實際工作中，特別是用自動生化分析儀測定同酶，條件固定時，從理論上來講和均為固定值，ε為常數，則將上述公式可簡化為為酶活性濃度定量系數或稱為常數，主要用于臨床酶活性測定的計算與校準。

系數值的意義與設臵系數值對于酶的測定十分重要，過高雖然測定的線性較寬，但重復性差，反之，雖然精密度好，但檢測線性窄。

值的設臵應考慮測定酶的參考范圍上限及測定時間兩方面，以保證測定結果的可靠。

系數值的類型與計算系數值只能供用戶通過計算式及求實測值時參考，不能直接用于酶活性濃度的計算。

常用指示物的摩爾消光系數與用途指示物主波長次波長用途εε測等εε測對硝基苯酚εε測對硝基苯胺ε測硫代硝基苯甲酸εε測八臨床酶學測定的標準化標準化途徑通過使用推薦方法和參考方法，以及使用公認的酶校準物或酶參考物等，使酶學測定標準化。

使用推薦方法和參考方法我國于年發表了測定人血清血漿中酶催化濃度方法總則，并于年年相繼通過了項推薦方法草案。

衛生行業標準臨床酶活性濃度測定方法總則編號也已由衛生部批準實施。

使用公認的酶校準物或酶參考物酶測定中最理想的校準方法是用穩定的定值準確的酶校準物或酶參考物對測定全過程進行校準。

酶活性濃度測定的參考系統于年決定建立包括下列要素的測定酶催化濃度的參考系統參考測定方法，以現有的的參考方法作為基礎，制定了套的標準操作方法參考實驗室網絡，選擇組參考實驗室包括廠家實驗室，為之提供必要的技術和儀器，使之在計量學高水平上按參考測定方法進行測定參考物，參考實驗室網絡對現有的參考物進行重新認證。

建立原級參考方法制備原級參考物建立參考實驗室網絡二酶質量測定免疫化學法測定酶質量原理利用酶蛋白的抗原性，制備特異性抗體，然后以免疫學方法測定酶蛋白質量。

質量單位多以來表示。

放射免疫測定分為直接法與間接法。

直接法是將放射性核素標記的酶分子與相應抗體作用產生沉淀，然后將沉淀分離并進行定量測定。

其他方法主要有免疫抑制法化學發光免疫測定酶免疫測定熒光酶免疫測定等。

國內曾有用免疫沉淀法單向擴散法測定酶活性的報告，如超氧化物歧化酶測定。

二酶質量免疫化學測定法的優缺點與傳統的酶活性測定法相比，免疫化學測定法的優點主要有靈敏度高，能測定樣品中用原有其他方法不易測出的少量或痕量酶特異性高，幾乎不受體液中其他物質，如酶抑制劑激活劑等的影響能用于些不表現酶活性的酶蛋白，如各種酶原或去輔基酶蛋白，或因遺傳變異而導致合成無活性的酶蛋白的酶測定特別適用于同工酶的測定。

酶免疫化學測定局限性要制備足夠量的提純酶作為抗原和具有免疫化學性質的抗血清常常是很困難的，且工作量較大測定步驟多，操作繁瑣測定成本高。

三同工酶檢測臨床同工酶或亞型的分析大致可分為兩步，即首先精確地分離出酶的各同工酶或亞型組分，然后測定酶的總活性和各同工酶或亞型組分的活性。

常用同工酶或亞型的分析方法方法同工酶或亞型的性質差異同工酶亞型電泳法區帶電泳等電聚焦電荷不同所有同工酶亞型層析法離子交換層析親和層析電荷不同免疫分析法免疫抑制法特異性抗體反應性不同免疫化學測定法特異性抗體反應性不同動力學分析法底物特異性分析法底物親和力不同羥丁酸抑制劑分析法對小分子量的抑制劑的特異性抑制不同草酸酒石酸尿素和苯丙氨酸氟和可卡因分析法最適不同熱失活分析法熱穩定性不同電泳法同工酶氨基酸組成不同，等電點不同，電泳遷移率也就不同，據此可用電泳法分離鑒定。

常用于分離同工酶電泳方法有醋酸纖維素薄膜電泳瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳等。

以同工酶為例，亞基含酸性氨基酸比亞基多，在的堿性緩沖溶液中帶負電荷較多，電泳速度比亞基塊，電泳結束時由正極向負極依次有共五條同工酶條帶。

電泳結束后，可用含乳酸酚嗪二甲酯硫酸鹽和氯化硝基四氮唑藍的染色液將區帶染色，染色原理為催化乳酸脫氫，脫下的氫由傳遞給，再由傳遞給，還原為紫紅色的化合物而使區帶染色。

染色后洗脫支持介質背景染料，用光密度掃描儀掃描區帶，或將區帶切下洗脫比色測定。

正常和幾種病理狀況時血清同工酶的瓊脂糖凝膠電泳分離圖譜用電泳法進行同工酶分析時，如顯示的區帶數與同工酶數不致時，要特別注意巨分子酶的存在。

巨分子酶形成的原因主要有酶與免疫球蛋白形成的復合物，如等酶與其他蛋白質形成的復合物，如脂蛋白等酶亞基或酶分子之間形成的聚合物，如聚合物亞基自身聚合等。

現已有關于和等巨分子酶的報道。

如，將可疑血清進行瓊脂糖凝膠電泳結合熒光染色掃描分析，發現巨位于與之間，巨位于的陰極側圖。

正常和病理狀況時瓊脂糖凝膠電泳分析血清同工酶可能出現的酶帶二層析法?離子交換層析和親和層析等常用于同工酶的提純與制備，也可用于臨床同工酶常規檢測。

?同工酶分子荷電量不同是離子交換層析法分離的基礎，常用的離子交換劑有二乙氨基乙基纖維素二乙氨基乙基葡聚糖二乙二羥丙氨乙基葡聚糖等。

三免疫分析法由于同工酶的級結構不同，因而免疫化學性質也不同。

利用純化的同工酶免疫動物制備特異性的抗血清，此抗體只與該同工酶產生特異性免疫反應。

因此，抗原決定簇不同的同工酶可用特異的免疫反應來識別。

應用較多的免疫分析法有免疫抑制法免疫沉淀法等。

四同工酶的其他分析方法底物專性分析法不同的同工酶底物專性不同，值也不同，如同工酶之間差別足夠大，可通過測定其值加以鑒定。

例選擇性抑制法同工酶各亞型對抑制劑敏感程度不同，或同抑制劑對不同同工酶有不同的抑制作用。

例前列腺釋放的酸性磷酸酶分析法不同同工酶可有不同的最適，如同工酶之間最適差別足夠大，可通過調節緩沖液，使待測同工酶維持完整活性的同時，其它同工酶活性受到抑制。

熱失活分析法利用不同同工酶的耐熱性不同進行分析與鑒定。

例血清酶血清酶的來源與去路血清酶的來源血清酶的去路血清酶的半壽期是指酶失活至原來活性半時所需時間，般以半壽期來代表酶從血中清除的快慢。

細胞酶外分泌酶非血漿特異酶血漿特異酶血清酶在血漿中發揮特定的催化作用的酶來源于消化腺或其他外分泌腺的酶存在于各組織細胞中進行代謝的酶類第三節常用酶及同工酶測定的臨床應用幾種血清酶的半衰期與分子量酶半壽期相對分子量約約約約約約腸骨約胎盤約約?衛生部“十二五”規劃教材全國高等醫藥教材建設研究會規劃教材首都醫科大學王培昌酶的概念與特征酶的組成結構與功能酶的本質和特征酶的結構和功能二酶的催化作用機制酶活性中心是酶分子執行催化功能部位酶反應的誘導契合學說三酶的命名習慣命名法系統命名法四酶的分類與編號第節概述酶的組成結構與功能酶的本質和特征酶的化學本質絕大部分的酶是蛋白質，有些酶是核酸和酶蛋白組成的復合體，極少數酶是核酸。

酶除了具有蛋白質的理化性質般催化劑的共同性質外，還具有極高的催化效率高度的特異性及催化作用的可調節性等特點。

由酶所催化的反應稱為酶促反應。

酶促反應過程中的幾個概念酶活性底物產物激活劑抑制劑核酶具有催化作用的核糖核酸。

酶的結構和功能酶和般蛋白質樣，具有二三乃至四級結構。

單體酶寡聚酶多酶體系多功能酶或串聯酶單純酶僅由氨基酸殘基構成的酶。

結合酶除含蛋白質外，還含有非蛋白部分金屬離子或小分子有機化合物，前者稱為酶蛋白，后者稱為輔因子。

二酶的催化作用機制酶活性中心是酶分子執行催化功能部位酶分子中能和底物特異結合并將底物轉化為產物的區域稱為酶的活性中心，酶活性中心是由空間上彼此靠近的化學基團組成的具有特定空間結構的區域。

酶反應的誘導契合學說在酶促反應中，酶與底物結合時，底物首先和酶分子上的活性中心相結合，形成酶底物中間復合物。

在構象上相互誘導，致使活性中心與底物完全緊密結合，這過程稱為誘導契合學說。

三酶的命名習慣命名法