及槽間的移動。?特點儀器體積較大，但變溫快時間準溫度均，目前國內應用較少。普通定性核酸擴增儀變溫金屬塊式儀?中心是由鋁塊或不銹鋼制成的熱槽，上有不同數目甚至不同規格的凹孔，用來放置樣品管。凹孔內壁加工精密，保證與樣品管緊密接觸。?般通過半導體加熱和冷卻，并由微機控制恒溫和冷熱處理過程，通過鍵盤和顯示器實現人機交流，并可編程存儲或刪除程序。?特點儀器裝置比較牢固耐用，溫度變換平穩，有利于保持聚合酶的活性。普通定性核酸擴增儀變溫氣流式儀?由機殼熱源冷空氣泵控制器及輔助元件等組成。?熱源由電阻元件和吹風機組成，形成熱空氣槍借空氣作為熱傳播媒介，由大功率風扇及制冷設備提供外部冷空氣制冷，精確的溫度傳感器構成不同的溫度循環。?特點儀器不用金屬精密加工，成本較低整個系統沒有液體流動及制冷劑，安全程度高。配上微機和軟件，可靈活編程。普通定性核酸擴增儀?按照功能用途可分為以下兩類?梯度儀?原位儀普通定性核酸擴增儀梯度儀?由普通儀衍生出的具溫度梯度功能的核酸擴增儀。?多種變性溫度和延伸溫度可在臺擴增儀上同時完成?既節省實驗時間提高實驗效率，又節約實驗成本。?梯度儀每個孔的溫度可以在指定范圍內按照梯度設置，根據擴增結果，步就可以摸索出最適退火條件。普通定性核酸擴增儀原位儀?是原位雜交與技術的結合。在細胞內進行擴增，而不破壞組織細胞的形態。?解決了以往手工方法操作復雜，擴增效果及實驗結果重復性不理想的問題。?與普通儀的區別其樣品基座上有若干平行的鋁槽，每條鋁槽內可垂直放置張載玻片，每張載玻片面均與鋁槽緊密接觸，溫度傳導極佳，控溫很精確。實時熒光定量核酸擴增儀熒光定量儀公司熒光定量儀公司熒光定量儀實時熒光定量核酸擴增儀?實時熒光定量，技術是在反應體系中加入特異性的熒光染料或探針，熒光信號的變化真實地反映了體系中模板的增加，通過檢測熒光信號達到定量的目的。實時熒光定量核酸擴增儀?實時熒光定量核酸擴增儀由兩部分組成系統和熒光檢測系統。?熒光檢測系統主要包括激發光源和檢測器，現在的主流的樣品槽開始其他定量反應，使用效率非常高。?升降溫速度高達，控溫精度高。每個模塊控制的激發光源和檢測器直接與反應管壁接觸，保證熒光激發和檢測不受外界干擾。各孔控溫的熒光定量儀?該類儀器整合多通道光學檢測系統，能有效分辨多種熒光染料，可對同樣品進行多靶點分析，同時檢測四種熒光信號。?可使用探針分子信標引物等多種檢測方法，定量線性范圍可達個數量級。其軟件允許臺儀器同時操作多個樣品模塊，既滿足高速批量要求，又能靈活運用，還可實現任意梯度反應。?缺點上樣不如傳統方法方便，而且需要獨特的扁平反應管，使用成本較高。適合多指標快速檢測，但目前在國內應用尚少。第二節擴增儀的分類與結構Ⅱ熒光定量儀第三節核酸擴增儀的性能指標操作規程及常見故障的排除?核酸擴增儀的性能指標?核酸擴增儀的操作規程?核酸擴增儀常見故障的排除核酸擴增儀的性能指標性能指標溫度控制熒光檢測其他溫度的準確性熱蓋溫度不同模式下的相同溫度特性升降溫的速度溫度的均性值重復性誤差檢測通道數量熒光檢測范圍基座容量和樣品數軟件功能溫度控制?溫度的準確性是指樣品孔溫度與設定溫度的致性，是反應最重要的影響因素之，直接關系到實驗的成敗。?溫度的均性是指樣品孔間的溫度差異，關系到不同樣品孔之間反應結果的致性。如“位置的邊緣效應”會影響結果的可重復性。?升降溫的速度升降溫速度快，能縮短反應進行的時間，提高工作效率，提高反應特異性。溫度控制?升降溫的速度升降溫速度快，能縮短反應進行的時間，提高工作效率，提高反應特異性。?熱蓋溫度熱蓋可使樣品管頂部溫度達到左右，避免蒸發而改變反應體積，無需再向反應管內添加石蠟油，減少了后續實驗的麻煩。熒光檢測?值重復性誤差?熒光檢測范圍?檢測通道數量其他?常用樣品管管聯排管孔微孔板等其他?新型的儀都常規使用優質配套軟件，此類軟件易學易用，還具有實時信息顯示記憶存儲多個程序，及自動倒計時自動斷電保護等功能，很多儀器還可以免費升級。第三節擴增儀的性能指標操作規程常見故障的排除核酸擴增儀的操作規程?普通擴增儀的操作非常簡便，接通電源，儀器自檢，按照程序設置溫度或調出儲存的程序運行即可。?定量擴增儀的操作和普通儀基本相同。核酸擴增儀常見故障的排除?熒光染料污染樣品孔請工程師清潔樣品孔?管融化可能是溫度傳感器出問題或是熱蓋出問題，需工程師檢修?個別孔擴增效率差異很大可能的原因是半導體模塊出現壞點，需工程師檢修核酸擴增儀常見故障的排除?熒光強度減弱或不穩定原因有濾光片發霉或有水汽等，需工程師檢修或光源損耗需更換光源或需調節檢測元件靈敏度，也需工程師調試?儀器工作時出現噪聲可能的原因是管沒有放好或風扇松動，需工程師檢修核酸擴增儀常見故障的排除?儀器采集熒光時有不正常的噪聲些光纖傳導信號的定量儀可能出現這問題，需工程師檢修或更換配件?機器搬動后不能正常工作或不能正常采集熒光信號對于些光路系統復雜的儀器，應盡量避免自行搬動儀器。出現這種情況后需工程師重新調試?反應假陰性原因很多，其中儀控溫不準也是個重要原因，可使用電子測溫儀校準溫度。第四節核酸擴增儀的臨床應用?感染性疾病的分子診斷和研究?遺傳性疾病的分子診斷和研究?惡性腫瘤的分子診斷和研究?在移植配型中的應用?在法醫學中的應用?在分子生物學其他領域的應用第十三章核酸擴增儀教學基本要求?掌握核酸擴增儀的工作原理和主要性能指標。?掌握梯度儀和原位儀的功能和特點。?掌握實時熒光定量擴增儀的種類及特點。?熟悉技術的原理擴增儀的種類熒光實時定量技術原理。?了解擴增儀的操作規程擴增儀常見故障的排除擴增儀的應用。內容提要第節核酸擴增儀的工作原理第二節核酸擴增儀的分類與結構第三節核酸擴增儀的性能指標操作規程及常見故障的排除第四節核酸擴增儀的臨床應用第節核酸擴增儀的工作原理?技術的發展簡史?技術的原理?核酸擴增儀的工作原理技術的發展簡史?年，等描述的項基于酶的體外復制實驗。?年美國公司在開車前去北加利福尼亞紅樹縣的條被月光籠罩的山路上構思了。?年，因此項技術獲諾貝爾化學獎。技術的發展簡史技術的原理?技術的本質是核酸體外擴增?加熱使雙鏈解開螺旋，在退火溫度條件下引物同模板雜交，在聚合酶和合適緩沖液存在條件下延伸引物，重復“變性退火引物延伸”過程至個循環，呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。技術的原理循環第步加熱變性技術的原理循環第二步引物與模板分子退火技術的原理循環第三步引物延伸技術的原理第個循環完成后得到兩個拷貝的靶序列技術的原理次循環后靶序列擴增的數量循環數擴增產物量,核酸擴增儀的工作原理?核酸擴增儀的工作關鍵是溫度控制核酸擴增儀的工作原理控溫方式水浴鍋控溫壓縮機控溫半導體控溫離心式空氣加熱控溫第二節核酸擴增儀的分類與結構?普通定性核酸擴增儀?實時熒光定量核酸擴增儀普通定性核酸擴增儀?按照變溫方式分為以下三類?水浴式儀?變溫金屬塊式儀?變溫氣流式儀普通定性核酸擴增儀水浴式儀?般由三個不同溫度的水浴槽和機械臂組成。?采用半導體傳感技術電子技術和計算機技術進行水浴溫度的測量顯示和控制?并經計算機控制由機械臂完成樣品在每個水浴槽的置放以及槽間的移動。?特點儀器體積較大，但變溫快時間準溫度均，目前國內應用較少。普通定性核酸擴增儀變溫金屬塊式儀?中心是由鋁塊或不銹鋼制成的熱槽，上有不同數目甚至不同規格的凹孔，用來放置樣品管。凹孔內壁加工精密，保證與樣品管緊密接觸。?般通過半導體加熱和冷卻，并由微機控制恒溫和冷熱處理過程，通過鍵盤和顯示器實現人機交流，并可編程存儲或刪除程序。?特點儀器裝置比較牢固耐用，溫度變換平穩，有利于保持聚合酶的活性。普通定性核酸擴增儀變溫氣流式儀?由機殼熱源冷空氣泵控制器及輔助元件等組成。?熱源由電阻元件和吹風機組成，形成熱空氣槍借空氣作為熱傳播媒介，由大功率風扇及制冷設備提供外部冷空氣制冷，精確的溫度傳感器構成不同的溫度循環。?特點儀器不用金屬精密加工，成本較低整個系統沒有液體流動及制冷劑，安全程度高。配上微機和軟件，可靈活編程。普通定性核酸擴增儀?按照功能用途可分為以下兩類?梯度儀?原位儀普通定性核酸擴增儀梯度儀?由普通儀衍生出的具溫度梯度功能的核酸擴增儀。?多種變性溫度和延伸溫度可在臺