1、“.....與細胞增殖或抑制方法樣,以已知活性的細胞因子標準品為對照。死活細胞情況可用同位素釋放法判斷,或應用臺盼蘭染色死細胞后直接計數。也可通過結晶紫萘酚藍黑等著染活細胞,再用脫色液脫出染料后酶標儀比色測定吸光值。死細胞數釋放量越高或比色測定的吸光值越低,表明待測細胞因子的細胞毒活性則越高。應用系列稀釋的細胞因子標準品,制作其活性與劑量關系的標準曲線,以此作為待測品活性的定量測定的基礎。本法常用于等的測定二細胞毒活性測定法基本原理?人干擾素?小鼠干擾素?大鼠干擾素??多種族的和本法常用于等的測定,可誘導細胞產生抑制病毒和合成的酶,保護細胞不受病毒感染,產生細胞病變效應。及等?細胞病變效應倒臵顯微鏡直接或結晶紫染色觀察?抑制病毒蝕斑形成或抑制病毒的產量三抗病毒活性測定法常用于檢測抗病毒活性的細胞株常用于攻擊細胞的病毒檢測抗病毒活性的方法經典方法將生長在的培養基的細胞按接種孔細胞培養板,每孔體積,株在孔板上貼壁生長過夜至每孔約萬個細胞,去除營養液后加入倍梯度稀釋的待測樣品或干擾素標準品......”。
2、“.....去除干擾素溶液,用水皰性口炎病毒攻擊定時間后至病毒對照孔細胞完全病變,用結晶紫染色指示。用能抑制細胞病變的最高稀釋度作為個干擾素單位。結果計算方法距離比例高于細胞病變抑制百分數高于細胞病變抑制百分數低于細胞病變抑制百分數再將高于的細胞病變抑制率的稀釋度的對數與距離比例相加,即為該干擾素的細胞病變抑制率的最高稀釋度的對數。?細胞病變程度分為個等級,即,表示無明顯,為,為,為。根據病變程度找出的標本稀釋范圍,并以此計算出距離比例和確定效價。該法操作復雜影響因素較多,在試驗前應對所用的病毒進行滴定。標本稀釋度兩孔平均細胞病變抑制程度細胞病變抑制積累細胞病變積累細胞病變抑制率細胞病變抑制法結果判斷舉例結果稀釋度介于之間,距離比例為,效價為同法計算標準品的稀釋度,將效價換算成國際單位,國際單位樣品的稀釋度標準品稀釋度標準品的單位。?趨化性誘導細胞向由趨化因子低濃度出向趨化因子高濃度處作定向移動的特性,可采用瓊脂糖和微孔小室趨化試驗。?化學增活性細胞因子增強細胞的隨機運動能力的特性......”。
3、“.....趨化因子誘導細胞移動的方式四趨化活性測定法敏感性較高特異性不高操作繁瑣易受干擾五生物學活性測定方法學評價第二節免疫學測定法細胞因子或受體與相應的特異性抗體單克隆抗體或多克隆抗體結合,通過同位素熒光或酶等標記技術加以放大和顯示,從而定性或定量顯示細胞因子或受體的水平。根據抗體性質和特異性不同,夾心法可分為與夾心法與夾心法雙夾心法細胞夾心法方法法是應用最為廣泛的非均相酶標免疫分析技術,步或多步的抗原抗體反應和步酶促反應構成的基本步驟,可作定性或定量分析。法不僅可以用術并借助流式細胞儀敏感的分辨力所建立的方法。該法主要用于細胞內細胞因子和細胞表面粘附分子的檢測,通過特異性的熒光抗體染色,能簡單快速地進行單個細胞水平的細胞因子或粘附因子的檢測,精確判斷不同細胞亞群細胞因子和膜分子的表達情況。分離和培養待檢細胞細胞固定封閉非特異性結合位點染色與分析基本步驟使用流式細胞分析法......”。
4、“.....保持良好狀態三酶聯免疫斑點試驗或在包被有待測細胞因子抗體的微孔板上,加入可分泌相應細胞因子的待測細胞,經在有或無刺激物存在的條件下培養,待測細胞分泌細胞因子于其周圍,并被板上的特異性抗體捕獲。后續的反應如同,即在洗去細胞后視用于試驗的酶標抗體為抗或二抗,分別作直接或間接法。個斑點代表個細胞因子分泌細胞,斑點的顏色深淺程度與細胞分泌的細胞因子量相關基本原理四免疫學測定方法學評價?優點特異性高操作簡便快速,無需依賴細胞株影響因素較少且易控制,重復性好,方法容易標準化。?缺點所測定的只是細胞因子的蛋白含量,與其生物活性不定呈正比結果與所用的抗體來源及親和力有很大的關系敏感性相對較低標本中細胞因子的可溶性受體......”。
5、“.....決定了在進行這些分子檢測時,必須對方法選擇和結果判斷作出綜合考慮。細胞因子的檢測方法多種多樣,各有利弊。?高敏感性方法特異性的降低廢棄物難處理?活性測定方法定性試驗?基因分析法利于細胞內定位分析操作煩瑣方法的聯合應用?常用臨床標本抗凝全血,并分離獲得單個核細胞?炎癥局部細胞因子的水平局部分泌液?細胞因子或粘附分子的細胞內定位檢測相應細胞?相應細胞因子的基因和表達相應細胞?療效觀察和預后判斷疾病急性期和恢復期雙份標本進行動態觀測?免疫熒光染色和流式細胞分析注意待檢細胞的活性和狀態,以保證結果的特異性二標本的適當選取?意義細胞因子具有網絡調節的狀調節的特點級聯效應或相互抑制作用的網絡系統。有助于提供有效的疾病診斷和機體免疫狀態信息?舉例?細胞巨噬細胞和上皮樣細胞分泌相應細胞因子的功能和?細胞平衡狀態和三細胞因子的聯合檢測二特定疾病診斷的輔助指標許多疾病過程均可出現粘附分子和細胞因子表達的異常改變......”。
6、“.....同時還可反映疾病的進程細胞因子檢測在特定疾病診斷中的意義二粘附分子檢測在特定疾病診斷中的意義粘附分子有可溶性和膜結合性兩種形式,均與機體的免疫狀態和疾病的發生有關,在炎癥腫瘤轉移和器官移植排斥反應中發揮著重要的作用。相關粘附分子的檢測有助于此類疾病的診斷。三評估機體的免疫狀態判斷治療效果及預后機體免疫應答的強弱可通過細胞因子或粘附分子的表達水平來反映,其過高或過低表達均系免疫調節異常的結果細胞因子和粘附分子的水平,作為觀察治療效果和判斷預后的重要指標接受治療的患者進行細胞因子水平的監測,對保證治療效果具有指導意義。細胞因子和細胞粘附分子的特性是什么可分為幾類基于促進細胞增殖生物學活性,檢測等方法所使用的細胞依賴株與檢測原則是什么細胞因子生物活性測定法的種類,各用于哪些細胞因子的檢測,主要優缺點法在細胞因子和粘附分子檢測可應用于哪些方面的原理用途與的異同是什么思考題在應用流式細胞術分析細胞因子時......”。
7、“.....免疫測定法的優勢是什么如何看待其現有的劣勢試推測解決現存的不足和改進方法的可能途徑。在臨床疾病診斷中,檢測細胞因子和粘附分子的意義是什么應用細胞因子檢測方法的原則有哪些如何利用細胞因子檢測來判斷細胞平衡如何從細胞因子檢測的角度,了解機體細胞巨噬細胞等細胞的功能細胞因子和粘附分子是構成免疫應答的重要物質基礎,檢測這些分子可反映機體的免疫狀態。細胞因子或粘附分子的檢測方法包括生物學測定法和免疫測定法兩大類。細胞因子和粘附分子檢測的臨床意義。對些特定疾病具有診斷價值對細胞因子治療具有監測和指導用藥的意義對機體的免疫狀態具有評價作用......”。
8、“.....其主要生物學功能是介導和調節免疫應答及炎癥反應,其化學本質是蛋白質或多肽。細胞因子細胞粘附因子是介導細胞間及細胞與細胞外基質間粘附作用的分子,其化學本質為糖蛋白,可以細胞膜表面表達和可溶性兩種形式存在。第節生物學測定方法基于檢測的分子生物學測定法?擴增法?印跡法?原位雜交法?核酸酶保護分析生物活性測定法生物學測定法分類根據細胞因子特定的生物學活性,應用相應的指示系統,同時與標準品對比測定,從而得知樣品中細胞因子的活性水平,般以活性單位表示生物活性測定法原理有助于細胞因子檢測的活性作用刺激細胞增殖或集落形成的活性維持細胞生長和存活的特性抑制細胞生長或破壞細胞的效應促進細胞趨化或抗病毒作用以細胞因子依賴性細胞株為靶向,通過觀察特定的細胞因子刺激或抑制依賴性細胞株增殖來評估細胞因子的活性水平。促進細胞增殖和增殖抑制測定法?直接計數法簡便直觀......”。
9、“.....在細胞的增殖過程中,合成的增加使得指示細胞對核苷或堿基的需求增多,若將核苷標記上可以示蹤的同位素,通過檢測細胞內的同位素含量,則可反映細胞增殖的程度。實驗前細胞濃度確定臺盼藍拒染實驗結果客觀易于自動化適用于大標本量的測定方法的特異性受依賴細胞株影響放射性污染放射性核素摻入法常見細胞因子摻入檢測法所需細胞及參考試驗條件細胞株所需濃度細胞數前培養時間后培養時間檢測細胞因子干細胞因子,特點不使用放射性核素,以細胞代謝變化為增殖指征指示細胞的增殖情況與線粒體琥珀酸脫氫酶代謝活性相關測定步驟類似與同位素摻入法相比摻入物而非反應條件選用的細胞及其濃度培養時間不同比色法四甲基偶氮唑鹽比色法細胞株原代細胞細胞終濃度細胞數加入前溫育時間加入后檢測細胞因子,度小鼠基質細胞細胞增殖或抑制活性檢測的比色法常用靶細胞對指示細胞具有破壞作用的細胞因子,若與細胞共育將會導致細胞死亡......”。
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