專院校和科研單位，它也逐漸進入醫院的中心實驗室和檢驗科。

第節流式細胞儀的工作原理細胞分析原理二細胞分選原理第節流式細胞儀的原理樣品進入流動室將懸浮分散的單細胞懸液，經特異熒光染料染色后，放人樣品管。

在氣體壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。

第節流式細胞儀的原理鞘液的作用流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細胞懸液的鞘液流，鞘液和樣品流在噴嘴附近組成個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點稱為測量區。

第節流式細胞儀的原理信號的產生與接收染色的細胞在測量區受激光照射后發出熒光，同時產生光散射。

這些信號分別被光電倍增管和光電二極管接收，經過計算機儲存計算分析這些數字化信息，就可得到細胞大小和核酸含量等指標。

第節流式細胞儀的原理當類細胞的特性與要分選的細胞相同時，流式細胞儀就會在這類細胞形成液滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉板間的靜電場時，依所帶電荷的符號分別向左偏轉或向右偏轉，落入指定的收集器內。

第二節流式細胞儀的結構流動室與液流驅動系統二激光光源與光束形成系統三光學系統四信號檢測與分析五細胞分選器第二節流式細胞儀的結構流動室與液流驅動系統?流動室由石英玻璃制成，并在石英玻璃中央開個孔，供細胞單個流過，檢測區在該孔的中心，流動室內充滿了鞘液，鞘液的作用是將樣品流環抱。

?樣品流在鞘流的環抱下形成聚焦，保證每個細胞通過激光照射區的時間相等，從而得到準確的細胞熒光信息。

第二節流式細胞儀的結構由右圖可知，空氣泵產生壓縮空氣，通過鞘流壓力調節器加在鞘液上恒定的壓力，這樣鞘液以勻速運動流過流動室，在整個系統運行中流速是不變的。

第二節流式細胞儀的結構由于激光焦點處的能量分布為正態分布見右圖，中心處能量最高。

因此，當樣本速率選擇高速時，處在樣本流不同位置的細胞或顆粒，受激光照射的能量不樣，從而被激發出的熒光強度也不相同。

第二節流式細胞儀的結構二激光光源與光束形成系統激光是種相干光源，它能提供單波長高強度及穩定性高的光照。

由于細胞的快速流動，每個細胞經過光照區的時間僅為左右，且細胞所攜帶熒光物質被激發出的熒光信號強弱，與被照射的時間和激發光的強度有關，因此細胞必須達到足夠的光照強度。

第二節流式細胞儀的結構三光學系統或熒光分子數目來表示，現在的均可達到檢測小于個熒光分子的指標。

第三節流式細胞儀的性能指標靈敏度前向角散射光檢測靈敏度是指能夠檢測到的最小顆粒大小，般目前商品化的可以測量到左右。

第三節流式細胞儀的性能指標二儀器的分辨率分辨率是衡量儀器測量精度的指標，通常用變異系數值表示是分布的標準誤差，是分布的平均值???第三節流式細胞儀的性能指標三分析速度分析速度以每秒分析的細胞數來表示。

當細胞流過光束的速度超過儀器響應速度時，細胞產生的熒光信號就會丟失，這段時間稱為儀器的死時間。

死時間越短，儀器處理數據越快，般可達到個秒左右。

大型機已達到每秒幾萬個細胞。

第三節流式細胞儀的性能指標四分選指標分選指標主要包括分選速度分選純度和分選收獲率。

?分選速度指每秒可提取所要細胞的個數。

?分選純度指要分選的目的細胞占分選出細胞的百分比。

?分選收獲率指被分出的細胞與原來溶液中該細胞的百分比。

第四節流式細胞儀的技術要求流式細胞分析儀器是項集多學科知識綜合應用的復雜儀器，除了對儀器各方面性能指標有嚴格的要求以外，在實驗設計與樣品處理方面也需要有豐富的基礎理論及操作經驗。

檢測樣品制備的重要性二常用的熒光染料與標記染色三操作技術的質量控制第四節流式細胞儀的技術要求檢測樣品制備的重要性因為流式細胞儀測量的是每個細胞所產生的散射光和熒光信號，如果兩個或多個細胞間粘連重疊或細胞碎片過多，都會影響信號的收集及所收集信號的真實性，所以制備單細胞懸液是進行流式細胞儀分析最關鍵的第步。

第四節流式細胞儀的技術要求二常用的熒光染料與標記染色散射光信號是激光照在細胞上所產生的前向光和側向光信號。

熒光信號來自于細胞的自發熒光或被分析細胞經特異性熒光標記染色后通過激光束激發后所產生的。

因此，被分析細胞在制備成單細胞懸液后，經過與熒光染料染色后才能上機進行檢測。

第四節流式細胞儀的技術要求三流式細胞儀操作技術的質量控制在臨床檢測中，應對各個工作環節和儀器性能進行嚴格的質量控制和規范化操作，以保證各項檢測數據和指標的可靠性。

光路與流路校正校準絕對計數的校準第四節流式細胞儀的技術要求光路與流路校正主要目的在于確保激光光路與樣品流處于正交狀態，使儀器檢測時的變異減少到最小，從而控制儀器的值。

在流路校正物中，有標準大小的熒光微球，其物理性質生物學特性和化學特性均經過標定。

第四節流式細胞儀的技術要求光電信增管校準流式細胞儀在使用過程中，光電倍增管隨時間的增加，其放大功率會有所改變，對樣品檢測的靈敏度會產生影響。

為保證樣品檢測時儀器處于最佳工作狀態，采用質控品進行校準，必要時進行電壓補償。

第四節流式細胞儀的技術要求絕對計數的校準為保證儀器在計數時的準確性，儀器應采用絕對計數標準品建立絕對計數標準。

該標準品是經標定的，如以計算個細胞為，作為設定標準。

在樣本測定時，以此為標準進行絕對計數，從而獲得絕對計數的標準值。

第五節流式細胞儀的維護儀器的維護激光電源的波動范圍應小于。

冷卻水須用過濾器，并保證壓力和流量。

室溫在，相對濕度小于。

安裝單獨的可靠的地線。

儀器操作必須有經過培訓的人員操作。

樣品和鞘液管道每周應用漂白粉液清洗。

第五節流式細胞儀的維護故障信息引起故障的原因解決方法清洗液高度錯誤清洗液少了加清洗液清洗液高度警示清洗液傳感器失靈與公司聯系數據處理速率錯誤數據太大，難以處理稀釋樣品文件名錯誤輸入的文件名與系統沖突輸入另個文件名二常見故障及排除第十五章流式細胞儀本章學習要求掌握流式細胞儀的原理掌握流式細胞儀的結構熟悉流式細胞儀的性能指標熟悉流式細胞儀的技術要求熟悉流式細胞儀的維護熟悉流式細胞儀的應用了解流式細胞儀的發展史概述第節流式細胞儀的工作原理第二節流式細胞儀的結構第三節流式細胞儀的性能指標第四節流式細胞儀的技術要求第五節流式細胞儀的維護第六節流式細胞儀的應用本章內容小結本章主要內容概述流式細胞儀的定義流式細胞術的定義生物學顆粒的內容流式細胞儀的發展史概述流式細胞儀的定義流式細胞儀是以激光為光源，集流體力學技術電子物理技術光電測量技術計算機技術以及細胞熒光化學技術單克隆抗體技術為體的新型高科技儀器。

概述生物學顆粒包括大的免疫復合物蛋白質病毒顆粒脂質體細胞器細菌霉菌染色體真核細胞雜交細胞聚集細胞等，所檢測的生物顆粒的理化性質包括細胞大小細胞形態胞漿顆?；潭群靠偟鞍踪|含量細胞膜完整性和酶活性等。

概述流式細胞術的定義應用流式細胞儀對處于快速直線流動狀態中的細胞或生物顆粒進行快速的多參數的定量分析和分選的技術稱為流式細胞術。

概述年年和年年利用年代年代概述年使懸浮的血紅細胞從個毛細玻璃管中流過，每個通過的細胞可被個光電裝置記錄下來，這可謂流式細胞儀的最初模型。

概述年用紫外吸收和可見光散射兩個參數同時測量未染色的細胞，給出了細胞中核酸的含量和細胞大小，奠定了多參數流式細胞測量的基礎。

概述年和采用了設計的層流流動室和氬離子激光器開發出了液流束照明光軸，檢測系統三者互相垂直的流式細胞儀，成為目前各種流式細胞測量儀的基礎。

概述年利用的靜電墨水噴射液滴偏轉技術，建立了流式細胞分選術。

和利用飛點掃描技術和縫掃描技術使零分辨率的流式細胞儀變成了低分辨率的流式細胞儀。

概述年代以來，流式細胞儀的數據采集存儲顯示分析日趨完善，隨著樣品制備方法的增多，新的熒光染料和細胞標記物的出現，流式細胞儀的應用范圍逐漸擴大。

概述進入年代，標本制備儀和自動進樣器的問世，以及適合臨床應用的單克隆抗體的增加，使流式細胞儀不僅出現在大專院校和科研單位，它也逐漸進入醫院的中心實驗室和檢驗科。

第節流式細胞儀的工作原理細胞分析原理二細胞分選原理第節流式細胞儀的原理樣品進入流動室將懸浮分散的單細胞懸液，經特異熒光染料染色后，放人樣品管。

在氣體壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。

第節流式細胞儀的原理鞘液的作用流動室軸心至外壁的鞘液也向下流動，形成包繞細胞懸液的鞘液流，鞘液和樣品流在噴嘴附近組成個圓柱流束，自噴嘴的圓形孔噴出，與水平方向的激光束垂直相交，相交點稱為測量區。

第節流式細胞儀的原理信號的產生與接收染色的細胞在測量區受激光照射后發出熒光，同時產生光散射。

這些信號分別被光電倍增管和光電二極管接收，經過計算機儲存計算分析這些數字化信息，就可得到細胞大小和核酸含量等指標。

第節流式細胞儀的原理當類細胞的特性與要分選的細胞相同時，流式細胞儀就會在這類細胞形成液滴時給含有這類細胞的液滴充以特定的電荷，帶有電荷的液滴向下落入偏轉板間的靜電場時，依所帶電荷的符號分別向左偏轉或向右偏轉，落入指定的收集器內。

第二節流式細胞儀的結構流動室與液流驅動系