特異性結合的綿羊紅細胞溶解,當溶血素和綿羊紅細胞濃度恒定時,溶血程度與補體含量和活性相關。
將新鮮待檢血清作不同稀釋后,加入反應體系,測定溶血程度,以溶血時的最小血清用量作為判定終點,可測知補體總溶血活性溶血程度與補體含量的關系?在適當穩定的反應系統中,溶血反應與補體的劑量依賴關系呈現形曲線?在輕微溶血和接近完全溶血時,補體量的變化對溶血程度的影響不大,即溶血對補體量的依賴不敏感。
但在溶血時,補體含量僅出現較小的變動,溶血程度也會發生較大的改變二測定方法紅細胞濃度的調整綿羊紅細胞采自綿羊頸靜脈,制備脫纖維羊血或用阿氏血液保存液制成抗凝血,保存備用。
使用前,調制成懸液。
為使紅細胞濃度標準化,可吸取少量紅細胞懸液,加入倍的稀釋液,在波長處測定吸光值以調整紅細胞濃度。
溶血素滴定?溶血素可通過免疫家兔獲得,般無需純化?試驗前需先行加熱或以滅活補體?溶血素有商品銷售,可按標識效價稀釋使用?自行制備的溶血素需進行滴定,確定使用濃度,在補體活性測定中,大多使用個單位。
?溶血素效價穩定,般使用個月后再作重新滴定稀釋緩沖液溶血標準管溶血溶血溶血總補體值的計算血清用量稀釋倍數三方法評價與臨床意義?方法簡便快速,但敏感性低,補體的活性除與反應體積成反比外,還與反應所用的緩沖液的數量以及反應溫度有關?總補體活性的參考范圍為?增高見于急性炎癥組織損傷惡性腫瘤等?降低見于系統性紅斑狼瘡類風濕性關節炎和強直性脊柱炎急性腎小球腎炎等第三節單個補體成分的測定?常作為單個補體成分的檢測指標因子和酯酶抑制物等?測定方法免疫溶血法檢測單個補體成分的活性,補體缺失性血清試劑免疫化學法檢測單個補體成分的含量,自動化免疫散射比濁法免疫溶血法?定義是根據補體參與抗體介導溶細胞作用的級聯效應特征建立的單補體成分檢測法?指示系統以抗為激活物和指示系統?參照體系以人為設計的缺乏種補體成分的血清為參照?結果判度若有溶血發生,表明待檢標本存在參照血清所缺乏的補體成分,且溶血程度與此補體成分的量呈正比,仍以溶在于多種細胞清除免疫復合物凈化機體內環境檢測補體受體,有助于判斷機體抗感染能力和計數相應的細胞數量補體受體目前已知的補體受體歸為以下五類,名稱別名分類配體細胞分布受體,受體紅細胞中性粒細胞單核細胞巨噬細胞細胞樹突狀細胞腎小球上皮細胞受體,病毒受體病毒細胞樹突狀細胞受體抗原植物凝集素些細胞多糖中性粒細胞單核細胞巨噬細胞樹突狀細胞細胞中性粒細胞單核細胞巨噬細胞血小板活化蛋白內皮細胞肥大細胞吞噬細胞補體受體特性第六節補體測定的應用補體相關試驗診斷梅毒螺旋體感染的華氏反應已淘汰分型的補體依賴性細胞毒試驗抗原抗體檢測的脂質體免疫試驗免疫粘連血凝試驗抗體形成細胞定量檢測的溶血空白斑技術免疫復合物測定的膠固素結合試驗和結合試驗應用于補體含量和活性檢測的試驗?和試驗反映總補體活性?溶血試驗?免疫化學試驗?免疫熒光技術檢測補體單個成分及其裂解產物因子等和補體受體圖血管神經性水腫補體含量和活性相關的疾病免疫相關性疾病如自身免疫性疾病時,和等缺陷超敏反應時型超敏反應,等過敏毒素的產生。
與補體有關的遺傳性疾病缺陷導致的嚴重感染與抑制物缺陷相關的遺傳性血管神經性水腫患者出現的細胞表面缺陷與清除障礙涉及因子因子缺陷的腎小球腎炎缺陷引起的陣發性血紅蛋白尿缺陷表現的嚴重頑固性皮膚損害,以及缺陷造成的免疫復合物性血管炎包括腎炎等。
圖血管神經性水腫補體含量顯著降低的疾病消耗增多免疫復合物形成導致的補體活化和消耗增多如補體的大量丟失主要見于大面積燒傷失血及腎臟病患者補體合成不足常見于肝臟疾病患者或營養不良的病人。
高補體血癥偶見于感染恢復期和些惡性腫瘤患者,正常妊娠時,也可觀察到補體值的增高。
已知補體的活化有三條途徑,試述三條激活途徑有何不同試述補體在抗感染免疫中有何作用補體有余種成分,各自的作用不同但相互聯系,補體的網絡系統中起關鍵作用的成分是哪幾個補體在參與機體免疫系統效應中發揮的主要作用是什么應用補體檢測抗原抗體的方法有幾種有無你認為可以建立但尚無人提及的思考題補體在參與人類疾病的病理損傷中發揮什么作用機體的免疫損傷或炎癥多發生于什么情況下損傷的機制是什么試比較各種補體檢測方法的優缺點和如何進行臨床應用選擇補體缺陷所表現的主要臨床特征是什么補體的主要理化特點是什么小結?補體是重要的參與固有免疫的可溶性球蛋白分子,同時有助于特異性抗體產生后效應的發揮,可有效地清除機體的可溶性免疫復合物,發揮徹底排除異物的功效。
與此同時,也可通過清除抗原抗體反應形成于組織或細胞膜上的復合物,造成炎癥損傷,參與疾病的形成過程。
?補體清除可溶性免疫復合物,與補體的溶細胞作用和調理吞噬作用的發揮相關。
?補體的檢測,主要是根據補體的抗原性和溶細胞活性設計的。
補體檢測的方法涉及總補體活性的測定和單個補體成分的檢測,其中總補體活性測定,在臨床應用廣泛者當數經典途徑的檢測法而單個補體成分檢測則包括溶血法與免疫化學法,后者可用于定量測定。
第十九章補體檢測及應用第節概述補體成分的含量與理化特性二補體的活化途徑第二節補體總活性測定第三節單個補體成分的測定免疫溶血法二免疫化學法第四節補體結合試驗試驗原理二試驗方法三方法評價第五節補體受體的測定第六節補體測定的應用思考題小結第節概述補體具酶樣活性不耐熱的糖蛋白其存在與抗原性異物的刺激無關在正常人血清中含量相對穩定些疾病時,含量及其活性可發生改變分類補體成分的含量與理化特性根據補體系統的生物學功能,可將其分為補體固有成分補體調節蛋白補體受體,三大部分。
補體理化性質?由肝細胞巨噬細胞以及腸粘膜上皮細胞等多種細胞產生均為多糖蛋白,大多數電泳遷移率屬球蛋白?含量約占血清球蛋白總量的,其中含量最高因子含量最低?固有成份間的分子量差異較大,其中最大因子最小。
?對熱不穩定即被滅活條件下活性只能保持。
?多種理化因素如射線機械振蕩酒精膽汁和些添加劑等均可破壞補體補體成分分子量電泳區帶血清含量參考值補體成分分子量電泳區帶血清含量參考值因子因子因子經典途徑二補體的活化途徑經典激活途徑替代激活途徑途徑激活物質抗原抗體復合物肽聚糖酵母多糖脂多糖相關的絲氨酸蛋白酶起始分子參與補體成分因子因子所需離子轉化酶轉化酶生物學作用參與特異性免疫的效應階段,感染后期發揮作用參與非特異性免疫的效應階段,感染早期發揮作用參與非特異性免疫的效應階段,感染早期發揮作用第二節補體總活性測定?補體總活性測定方法是以紅細胞的溶解為指示,以溶血為判斷終點,稱為?補體活化途徑不同,應用不同的激活物可活化不同的補體途徑?基于經典途徑的臨床常規項目應用于旁路檢測的尚未列入檢驗常規途徑活性測定的可靠方法暫未建立測定法的原理應用綿羊紅細胞,和其相應的抗體溶血素,作為能誘導補體活化經典途徑的指示物和激活劑。
補體能使溶血素特異性結合的綿羊紅細胞溶解,當溶血素和綿羊紅細胞濃度恒定時,溶血程度與補體含量和活性相關。
將新鮮待檢血清作不同稀釋后,加入反應體系,測定溶血程度,以溶血時的最小血清用量作為判定終點,可測知補體總溶血活性溶血程度與補體含量的關系?在適當穩定的反應系統中,溶血反應與補體的劑量依賴關系呈現形曲線?在輕微溶血和接近完全溶血時,補體量的變化對溶血程度的影響不大,即溶血對補體量的依賴不敏感。
但在溶血時,補體含量僅出現較小的變動,溶血程度也會發生較大的改變二測定方法紅細胞濃度的調整綿羊紅細胞采自綿羊頸靜脈,制備脫纖維羊血或用阿氏血液保存液制成抗凝血,保存備用。
使用前,調制成懸液。
為使紅細胞濃度標準化,可吸取少量紅細胞懸液,加入倍的稀釋液,在波長處測定吸光值以調整紅細胞濃度。
溶血素滴定?溶血素可通過免疫家兔獲得,般無需純化?試驗前需先行加熱或以滅活補體?溶血素有商品銷售,可按標識效價稀釋使用?自行制備的溶血素需進行滴定,確定使用濃度,在補體活性測定中,大多使用個單位。
?溶血素效價穩定,般使用個月后再作
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