抗酸性細菌。三鞭毛染色原理細菌的鞭毛能被堿性復紅酒精飽和溶液著色，是因為在染色過程中隨著酒精的蒸發其染料沉積在鞭毛上，使鞭毛著色。堿性復紅作為主要染料，而丹寧酸為媒染劑。方法采用點種法接種的變形桿菌或其他鞭毛菌，近離接種點的菌，鞭毛細，菌體較短遠離接種點的菌，鞭毛粗，菌體長，用無菌接種環取遠離接種點的菌混懸于盛有無菌蒸溜水的平皿內，不要研磨以免鞭毛脫落，置室溫放置，使鞭毛膨大。用毛細滴管將菌液滴于潔凈的玻片上，緩慢傾斜玻片任菌液流開，始之成為均勻薄膜，將玻片置溫箱內，任其自然干燥，切勿用火焰固定。在干燥標本片上滴加鞭毛染色液滴，使覆蓋于薄膜上，作用后輕輕用水沖，干后鏡檢觀察。結果菌體染成紅色或深紫色，鞭毛染成淡紅色或淡紫色，染色時間越長，鞭毛越粗。四莢膜染色原理莢膜為細菌細胞壁外圍的黏液層，對染料的親和力很低，用般染色不易著色，必須通過莢膜染色方法或襯托染色，方能清晰辨認出莢膜。方法用有莢膜的細菌培養物涂片，火焰固定，固定標本后加結晶紫染液，室溫保持后，倒去染液，然后用硫酸銅水溶液沖洗染液，勿水洗。待干后鏡檢觀察。結果菌體為深紫色，莢膜為無色或淡紫色。二培養接種劃線接種方法斜線法曲線法方格法放射法四格法。斜線法曲線法方格法放射法四格法二培養基血平板巧克力血平板伊紅美藍平板麥康凱平板平板平板三生化反應碳水化合物的代謝試驗糖醇苷類發酵試驗原理不同種類細菌含有發酵不同糖醇苷類的酶，因而對各種糖醇苷類的代謝能力也有所不同，即使能分解種糖醇苷類，其代謝產物可因菌種而異。檢查細菌對培養基中所含糖醇苷降解后產酸或產酸產氣的能力，可用以鑒定細菌種類。方法在基礎培養基中如酚紅肉湯基礎培養基加入的特定糖醇苷類。所使用的糖醇苷類有很多種。將待鑒定的純培養細菌接種入試驗培養基中，置孵育箱內孵育數小時后，觀察結果若用微量發酵管，或要求培養時間較長時。結果能分解糖醇苷產酸的細菌，培養基中的指示劑呈酸性反應如酚紅變為黃色，產氣的細菌可在小倒管小管中產生氣泡，固體培養基則產生裂隙。不分解糖則無變化。應用是鑒定細菌最主要和最基本的試驗，特別對腸桿菌科細菌的鑒定尤為重要。葡萄糖代謝類型鑒別試驗試驗原理細菌水解七葉苷的能力。七葉苷被細菌分解生成的七葉素，七葉素與培養基中的枸櫞酸鐵的二價鐵離子發生反應形成黑色化合物。方法將被檢菌接種于膽汁七葉苷培養基中，孵育后，觀察結果。結果培養基完全變黑為陽性，不變黑為陰性。應用主要用于鑒別腸球菌與其他鏈球菌的區別，以及腸桿菌科的些種些厭氧菌如脆弱擬桿菌等的初步鑒別。腸球菌本試驗為陽性。二細菌對于蛋白質和氨基酸的代謝試驗明膠液化試驗原理些細菌可產生種胞外酶明膠酶，能使明膠分解為氨基酸，從而失去凝固力，半固體的明膠培養基成為流動的液體。方法將被檢菌穿刺接種于明膠培養基，于培養，逐日觀察結果。若用孵育，因明膠在此溫度下自行液化，故在觀察結果前，先置冰箱內，再看結果。結果培養基呈液化狀態為陽性。應用腸桿菌科細菌的鑒別，如沙雷菌普通變形桿菌奇異變形桿菌陰溝桿菌等可液化明膠，而其他細菌很少液化明膠。有些厭氧菌如產氣莢膜梭菌脆弱類桿菌等也能液化明膠。另外多數假單胞菌也能液化明膠。陰性陽性吲哚靛基質試驗原理些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚靛基質，當加入吲哚試劑對二甲氨基苯甲醛后則形成紅色的玫瑰吲哚。培養基蛋白胨水培養基。方法將待檢菌接種于上述培養基中，于培養，沿試管壁慢慢加入吲哚試劑。結果于兩者液面接觸處出現紅色為陽性，無色為陰性。應用主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。硫化氫試驗原理些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸如胱氨酸半胱氨酸產生硫化氫，硫化氫遇鉛或亞鐵離子則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。此試驗可間接檢測細菌是否產生硫化氫。培養基醋酸鉛培養基。方法將待檢菌穿刺接種于醋酸鉛培養基，于培養觀察結果。結果培養基變黑為陽性，不變為陰性。應用主要用于腸桿菌科中屬及種的鑒別。如沙門菌屬愛德華菌屬亞利桑那菌屬枸櫞酸桿菌屬變形桿菌屬細菌，絕大多數硫化氫陽性，其他菌屬陰性。沙門菌屬中也有硫化氫陰性菌種。尿素分解試驗原理些細菌具有尿素分解酶，能分解尿素產生大量的氨，使培養基呈堿性。培養基尿素培養基。方法將待檢菌接種于尿素培養基，于培養觀察結果。結果培養基呈堿性，使酚紅指示劑變紅為陽性，不變為陰性。應用主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細菌的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌脲酶陽性。另外雷氏普羅威登菌和摩根菌為陽性，而斯氏和產堿普羅威登菌陰性。陽性陰性陰性苯丙氨酸脫氨酶試驗原理些細菌可產生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，加入氯化鐵試劑后產生綠色反應。培養基苯丙氨酸瓊脂培養基。方法將被檢菌濃厚接種于苯丙氨酸瓊脂培養基斜面上，于培養，滴加三氯化鐵試劑滴，自斜面上方流下。結果出現綠色為陽性。應立即觀察結果，延長反應時問會引起褪色。加氯化鐵試劑出現綠色為陽性應用主要用于腸桿菌科細菌的鑒定。變形桿菌屬普羅威登斯菌屬和摩根菌屬細菌均為陽性，腸桿菌種中其他細菌均為陰性。氨基酸脫羧酶試驗原理具有氨基酸脫羧酶的細菌，能分解氨基酸使其脫羧生成胺賴氨酸尸胺，鳥氨酸腐胺，精氨酸精胺和二氧化碳，使培養基變堿。使指示劑顯示出來。培養基氨基酸脫羧酶培養基和氨基酸對照培養基。方法將被檢菌分別接種于賴氨酸或鳥氨酸或精氨酸培養基和氨基酸對照培養基中，并加入無菌液體石蠟或礦物油，于培養，每日觀察結果。結果孵育后，對照管應呈黃色，測定管呈紫色指示劑為溴甲酚紫為陽性若測定管呈黃色為陰性。若對照管呈現紫色則試驗無意義，重新做試驗。氨基酸對照鳥氨酸賴氨酸鳥氨酸為陽性賴氨酸為陰性氨基酸對照第章臨床微生物學檢驗技術安徽醫科大學徐元宏細菌形態學檢驗制片涂片取潔凈載玻片張，用標記筆分為二，用接種環取生理鹽水環，分別置于玻片兩端，接種環滅菌后，取金黃色葡萄球菌斜面培養物少許與鹽水混勻，并涂成均勻薄膜涂片。接種環滅菌后以同樣方法再取大腸埃希菌少許，與另端生理鹽水混勻后涂成均勻薄膜。如用液體材料，如痰尿液膿汁等可直接涂片，不必加生理鹽水。干燥涂片最好在室溫下自然干燥，必要時可將標本面向上，小心間斷地在弱火高處烘干，但切勿緊靠火焰將涂膜烤枯。固定涂片干燥后，將標本片在酒精燈上快速的來回通過三次，共約，注意溫度不可太高，以涂片涂膜的反面觸及皮膚覺輕微燙覺即可。固定目的殺死細菌使菌體與玻片粘附較牢，在染色時不致被染液和水沖掉菌體蛋白變性易著色。涂片干燥固定染色鏡檢二革蘭染色法原理革蘭陽性細菌細胞壁結構較致密，肽聚糖層厚，脂質含量少，乙醇不易滲入革蘭陰性菌細胞壁結構較疏松，肽聚糖層少，脂質含量多，乙醇易滲入。革蘭陽性菌的等電點低，革蘭陰性菌的等電點較高，在相同條件下，革蘭陽性菌所帶負電荷比革蘭陰性菌多，與帶正電荷的結晶紫染料結合較牢固不易脫色。革蘭陽性菌細胞內含有大量核糖核酸鎂鹽，可與結晶紫和碘牢固的結合成大分子復合物，不易被乙醇脫色而革蘭陰性菌細胞內含極少量的核糖核酸鎂鹽，吸附染料量少，形成的復合物分子也較小，故易被乙醇脫色。染色方法標本涂片干燥和固定。染色在已固定細菌涂片上滴加結晶紫染液數滴，室溫作用，用細流水輕輕沖洗，甩去積水。再滴加碘液數滴，室溫作用，沖洗。滴加酒精數滴，輕輕搖動玻片幾秒鐘，使均勻脫色，然后斜持玻片，使脫掉的染料隨酒精流去，再滴加酒精，直到流下的酒精無色為止約需，立即用細流水將酒精沖掉。再滴加稀釋石炭酸復紅液復染約后用細流水沖洗。標本染色后，晾干或用吸水紙吸干，滴香柏油后用油鏡觀察。結果紫色為革蘭陽性菌，紅色為革蘭陰性菌。二抗酸染色原理分枝桿菌細胞壁含脂質較多，其中主要成分為分枝菌酸，此物具有抗酸性，染色時與石炭酸復紅結合牢固，能抵抗酸性乙醇的脫色作用，因此抗酸菌能保持復紅的顏色，達到染色目的。方法萋納石炭酸復紅染色，加溫促使菌體著色流水沖洗，鹽酸酒精脫色呂氏美藍復染。結果未脫色細菌呈紅色為抗酸性細菌,脫色經復染呈藍色的細菌為非抗酸性細菌。三鞭毛染色原理細菌的鞭毛能被堿性復紅酒精飽和溶液著色，是因為在染色過程中隨著酒精的蒸發其染料沉積在鞭毛上，使鞭毛著色。堿性復紅作為主要染料，而丹寧酸為媒染劑。方法采用點種法接種的變形桿菌或其他鞭毛菌，近離接種點的菌，鞭毛細，菌體較短遠離接種點的菌，鞭毛粗，菌體長，用無菌接種環取遠離接種點的菌混懸于盛有無菌蒸溜水的平皿內，不要研磨以免鞭毛脫落，置室溫放置，使鞭毛膨大。用毛細滴管將菌液滴于潔凈的玻片上，緩慢傾斜玻片任菌液流開，始之成為均勻薄膜，將玻片置溫箱內，任其自然干燥，切勿用火焰固定。在干燥標本片上滴加鞭毛染色液滴，使覆蓋于薄膜上，作用后輕輕用水沖，干后鏡檢觀察。結果菌體染成紅色或深紫色，鞭毛染成淡紅色或淡紫色，染色時間越長，鞭毛越粗。四莢膜染色原理莢膜為細菌細胞壁外圍的黏液層，對染料的親和力很低，用般染色不易著色，必須通過莢膜染色方法或襯托染色，方能清晰辨認出莢膜。方法用有莢膜的細菌培養物涂片，火焰固定，固定標本后加結晶紫染液，室溫保持后，倒去染液，然后用硫酸銅水溶液沖洗染液，勿水洗。待干后鏡檢觀察。結果菌體